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三种方法去除残留消毒剂的效果观察

作者:三种方法去除残留消毒剂的效果观察  来源:三种方法去除残留消毒剂的效果观察  发布时间:2010/1/12 15:07:46
      提要:目的观察三种残余消毒剂去除方法在应用中可能会出现的问题,以求更准确地评价化学消毒剂杀菌效果。方法采用载体定量杀菌试验方法,对化学中和法、稀释法和中和过滤冲洗法等三种方法对抑菌作用较强的胍类消毒剂去除效果进行了评价。结果用5 g/L组氨酸、3 s/L卵磷脂和30 g/L吐温80组成的中和剂,用化学中和法对含5O L双胍类消毒液中残留作用去除不彻底,各组长菌数不符合中和剂试验要求;但对含5 L双胍类消毒剂的残留作用可达到有效去除效果。相同的中和剂用中和稀释法,对含5O g/L和5 g/L两种浓度的胍类消毒剂残留毒性均可达到有效去除效果。用中和过滤冲洗法不能有效去除含量50 g/L的胍类消毒液残余作用,但可有效去除含量为5 g/L胍类消毒液对试验菌的残留作用。用上述复方中和剂进行杀菌效果评价验证试验,以含50g/L双胍类消毒液对载体上枯草杆菌黑色变种芽孢作用60 min,用化学中和法与过滤冲洗去除残余消毒剂,消毒后检不出存活细菌;而用中和稀释法去除残余消毒剂方法消毒后存活菌数为189 000 cfu/片,平均杀灭率为91,54% 。用含5 g/L双胍类消毒液对载体上该细菌芽孢作用60 min,三种去除残余消毒剂的方法检验出的消毒后存活菌数基本一致,平均杀灭率完全一致。结论三种去除残余消毒剂的方法中,以中和稀释法效果最好,可用于高浓度抑菌作用较强的消毒剂杀菌效果评价。
关键词: 中和剂;化学中和法;稀释法;过滤法;双胍类消毒剂;载体定量试验
在化学消毒剂家族中有许多种类表现出很强的抑菌作用,这给消毒效果评价试验带来一定的困难,双胍类化合物就是一类抑菌作用较强的消毒剂。在评价抑菌作用较强的试验中,经常使用一些综合作用的方法来去除残余消毒剂。为了解常用的去除残余消毒剂的方法效果,我们在实验室用化学中和法、化学中和稀释法和中和过滤冲洗法等三种方法对双胍类残留消毒剂的去除效果进行了观察。现将结果报告如下。
1 方法
1.1试验菌片的制备
取枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)纯培养,经过分离、纯化和增菌培养,按细菌芽孢培养制备程序,生产枯草杆菌黑色变种芽孢悬液,用胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)稀释制备成试验用芽孢悬液。取10ul芽孢悬液,滴染平纹棉布片(10 mm×10 mm)上,
干燥后备用。
1.2残余消毒剂去除试验方法
1.2.1化学中和法按照2002年版《消毒技术规范》规定程序,设计6组试验。
① 消毒剂+试验菌片→移5 ml稀释液中→原液接种
② (消毒剂+试验菌片)+移5 ml中和剂中→原液接种
③ 试验菌片+中和剂→+中和剂系列稀释→接种
④ 试验菌片+中和产物→中和产物系列稀释→接种
⑤ 试验菌片+稀释液→稀释液系列稀释→接种
1.2.2化学中和稀释法设计5组试验,第3、4组均用中和剂溶液稀释,第5组用稀释液进行稀释。
① 消毒剂+稀释液一移5 ml稀释液中→原液接种
②(消毒剂+试验菌片)+中和剂作1O-2稀释→接种
③ 试验菌片+中和剂→中和剂系列稀释→接种
④ 试验菌片+ 中和产物→中和剂系列稀释→接种
⑤ 试验菌片+稀释液→稀释液系列稀释→接种
1.2.3中和过滤冲洗法设计4组试验,第2、3组用无菌抽滤系统进行过滤冲洗,滤膜孔径为0.45um.
① 消毒剂+试验菌片→移5 ml稀释液中→原液接种
②(消毒剂+试验菌片)+5 ml中和剂中→原液过滤冲洗,贴膜
③ 试验菌片+稀释液→+稀释液系列稀释→过滤冲洗,贴膜
④ 试验菌片+稀释液→稀释液系列稀释→接种
1.3杀菌效果评价验证试验
采用载体定量法,在20℃水浴条件下进行试验。试验时按5 mL/片的量分别加入消毒剂溶液于无菌平皿内,然后将试验菌片浸于消毒液内,作用至规定时间。取出菌片移人含有5 rnl中和剂溶液的试管中,然后按上述三种方法分别进行残留消毒剂去除。将中和作用后的样液接种培养,冲洗过滤作用后的滤膜贴在培养基上进行培养,计算并比较杀菌效果。
2结果
2.1化学中和法试验结果
试验结果表明,用5 g/L组氨酸、3 g/L卵磷脂和30 g/L吐温80的磷酸盐缓冲液(PBS)组成的中和剂,对含50 g/L双胍类消毒液中和作用显示,第2、4组不长菌,不符合中和剂试验的要求;说明用化学中和法不能完全去除该浓度胍类消毒剂残留毒性。用本组中和剂按化学中和法进行试验,可有效中和含5 g/L双胍类消毒剂的残留作用,符合中和剂鉴定试验的要求。
2.2化学中和稀释法试验结果
各试验菌片在经中和剂中和作用后,对第2、4组分别用中和剂进行稀释,结果表明用上述中和剂进行中和稀释对含50 g/L和5 g/L两种浓度的胍类消毒剂残留毒性均可达到有效去除效果。试验各组细菌生长数均符合规定要求。结果说明使用化学中和剂加稀释,可明显改善中和剂效果。
2.3中和过滤冲洗法试验结果
试验用上述中和剂首先对作用后的菌片进行中和作用,然后将样液经滤膜过滤并用中和剂连续冲洗。结果表明,用中和过滤冲洗法不能有效去除含量50 g/L的胍类消毒液残余作用,因第2组仍无菌生长。但用同样方法和中和剂,可有效去除含量为5 g/L胍类消毒液对试验菌的残留作用,各组生长菌数符合中和剂鉴定试验规定要求。
2.4杀菌效果评价验证试验结果
以含5 g/L组氨酸、3 g/L卵磷脂与30 g/L吐温80的PBS作为中和剂,分别观察了化学中和法、化学中和稀释法和中和过滤冲洗法对两组浓度胍类消毒剂杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果。试验结果表明,含50 g/L双胍类消毒液对载体上该细菌芽孢消毒作用60 min,化学中和法与过滤冲洗法两种去除残余消毒剂方法得出的结果全部无菌生长,而用中和稀释法去除残余消毒剂方法消毒后存活菌数为189 000 cfu/片。用含5 g/L双胍类消毒液对载体上该细菌芽孢作用60 min,三种去除残余消毒剂的方法检验出的消毒后存活菌数基本一致。说明,用化学中和稀释法具有比较好的去除消毒试验中残余消毒剂的能力。
3讨论
自2002年版《消毒技术规范》颁布以来,对化学消毒剂杀菌效果评价试验中残余消毒剂去除方法有不少研究报道。这些报道的研究目的不尽相同,但都是围绕抑菌作用较强类型消毒剂或试验方法特殊的杀菌效果评价方法而展开的,并且取得比较好的进展。很多研究所反应的多是单一方法,尚未见将几种方法对同一消毒因子去除效果作平行比较的研究,但这种比较非常有意义。本研究以枯草杆菌黑色变种芽孢为指标,以双胍类消毒剂为去除对象,用1组复方中和剂观察了化学中和法、化学中和稀释法和中和过滤冲洗法等三种方法对同一消毒因子去除效果。试验中发现,对抑菌作用较强但浓度较低的消毒剂,用化学中和法、化学中和稀释法和中和过滤冲洗法去除残留毒性,均能达到较好的去除效果,结果基本一致;但三种方法对高浓度消毒剂的残余作用去除效果存在明显差别,其中以化学中和稀释法效果较好,而用化学中和法和中和过滤冲洗法均不能完全去除其残留消毒剂。因此,在进行化学消毒剂消毒效果检测时,过去认为遇到不容易中和的消毒剂,一般采用中和过滤冲洗法基本就可解决的认识存在不可靠性,值得进一步探讨。本研究结果认为,对抑菌作用较强但浓度又高且对细菌芽孢杀灭效果较差的消毒剂,用化学中和稀释法效果较好,可避免出现假阴性结果。本研究只进行了细菌芽孢为指标菌,仅对1类消毒剂进行了观察,此结果是否具有普遍性,还需要进行多种试验指标菌和多种化学消毒剂的试验研究加以证明。
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