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三种方法检测消毒剂杀菌效果的结果比较

作者:本站  来源:新疆杀菌剂网  发布时间:2011-6-14 7:41:03
三种方法检测消毒剂杀菌效果的结果比较
提要:对三种方法检测戊二醛溶液,二氯异氰尿酸钠溶液系灭枯草杆菌黑色变种芽孢的效果进行了比较。结果, 用欧洲标准悬液定量杀菌试验. 改良欧洲悬液定量杀菌试验和载体浸泡定量杀菌试验检测含戊二醛2% (g/m1)溶液杀灭枯草杆菌黑色变种芽化达消毒合格标准, 作用时间分别为2.5.3.0,2.0 h。用前两方法检测含有效氯4 500 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液及用载体方法检测含有效氯l 000 mg/L该液杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢达消毒合格标准,作用时间分别为30,20.10 min。当染菌片的芽孢悬液中增含小牛血清50%(ml/m1)时, 用载体方法检测含有效氯5 000 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液杀灭该芽孢达消毒合格标准,作用时间近20 min, 与用欧洲标准悬液法检测者(30 min)相近 表明三种方法检测受有机物影响较小的戊二醛杀菌效果相差较小,检测受有机物影响较大的二氯异氰尿酸钠杀菌效果相差较大。后者可能与方法中含有机物多少有关。
关键词:悬液杀菌试验; 载体杀菌试验; 戊二醛; 二氯异氰尿酸钠; 杀芽孢剂;枯草杆菌黑色变种;试验方法
为了解用欧洲标准悬液定量杀菌试验(简称欧洲标准悬液法)、改良欧洲悬液定量杀菌试验(简称改良欧洲悬液法)和载体浸泡定量杀菌试验(简称载体法)检测消毒剂杀菌效果的差别, 在实验室用三种方法同时检测了强化中性戊二醛(北京四环卫生药械厂产, pH 7.0)、二氯异氰尿峻钠(山东鄄城县精细化工厂产, 含有效氯54 43%(g/g)] 对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果。现将结果报告如下。
1方法
1.1菌悬液与菌片的制备
在欧洲标准悬液法和改良欧洲悬液法中, 用含胰蛋白胨0,1% (g/m1) 和氯化钠0,85% (g/m1) 的去离子水溶液(pH6 8~7 0), 将枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽孢稀释至规定含菌量的悬液。在载体法中, 用含蛋白胨0.1% (g/m1)的磷酸盐缓冲液(PBS, pH 7.2~7,4)制成的枯草杆菌黑色变种芽孢悬液滴染1,0 cm×1,0 cm 布片, 制成菌片。
l.2中和剂选择试验
因悬液法中和剂选择试验结果可适用于载体试验中, 故试验用欧洲标准悬液法进行。试验设6组, 第l组到第5组, 皆将0.5 ml含牛血清白蛋白(SIGMA公司产) 3% (g/m1) 的去离子水溶液(过滤除菌后使用) 加入无菌试管中, 再加0,5 ml枯草杆菌黑色变种芽孢悬液, 混匀。然后, 第l、2组均加入4.0 ml消毒剂溶液(用标准硬水配制), 作用至预定时间, 第l组吸取0,5 ml加到含有4.5 ml PBS的试管中, 第2组吸取0,5 ml加到含有4 5 ml中和剂溶液的试管中; 第3组加入4.0 ml中和剂溶液, 作用 预定时间, 吸取0、5 ml加到含有4,5 ml中和剂溶液的试管中; 第4组加入4.0 ml中和产物(1份消毒剂溶液加4份中和剂溶液, 中和作用l0 min) 溶液,作用至预定时间, 吸取0.5 ml加到含有4.5ml中和产物溶液的试管中: 第5组加入4.0ml PBS, 作用至预定时间, 吸取0.5 ml加到含有4.5 ml PBS的试管中。第6组为中和剂溶液、中和产物溶液和胰蛋白胨大豆蛋白胨培养基(TSA)阴性对照。试验结果,以第l组不长菌或长菌量远低于第2组, 第2组长菌量不低于l00 cfu/ml, 第3、4、5组长菌量达5.0×l0 ~5.0×l0。cfu/ml且组间菌数相差不超过l0% , 第6组不长菌, 为所选中和剂合适。
1.3定量杀菌试验
1.3.1欧洲标准悬液定量杀菌试验 向试管内加入0.5 ml含牛血清白蛋白3%(g/m1) 的去离子水溶液和0.5 ml枯草杆菌黑色变种芽孢悬液, 混匀, 再加入4.0 ml消毒剂溶液(阳性对照组为无菌蒸馏水),混匀并立即记时。作用至规定时间, 取0.5ml混悬液, 加于4.5 ml中和剂溶液中, 混匀。中和作用l0 min, 取0.5 ml该液或其稀释液接种无菌平皿, 一式两份。倾注l8~ 20 ml TSA 培养基, 混匀。置(37±1)℃培养72 h, 计数菌落数, 计算杀灭率。
1.3.2改良欧洲悬液定量杀菌试验 除用含蛋白胨l 0/0(g/m1) 的PBS代替含牛血清白蛋白的去离子水外, 其他操作与消毒液用硬水配制均同欧洲标准悬液定量杀菌试验。
1.3.3载体浸泡定量杀菌试验 向无菌平皿中加入5.0 ml消毒剂溶液(用蒸馏水配制, 阳性对照组为PBS), 置(20±1)℃ 水浴上恒温, 再加入l片菌片。作用至规定时间, 将菌片移人含有5.0 ml中和剂溶液的试管中。中和作用l0 min, 敲打试管80次, 以洗脱菌片上的细菌并混匀。取0.5 ml洗脱液或其稀释液接种无菌平皿, 一式两份。倾注l8~20 ml TSA 培养基, 混匀。
置(37±1) ℃培养72 h, 计数菌落数, 计算杀灭率。
2结果
2.1中和剂试验结果
结果证明, 用含甘氯酸1% (g/m1)、吐温80 1% (ml/m1)的溶液中和试验浓度的戊二醛, 用含硫代硫酸钠0.5%(g/m1)的PBS中和试验浓度的二氯异氰尿酸钠溶液, 均符合所定要求。
2.2戊二醛杀菌效果
经试验比较, 用三种试验方法检测含戊二醛2% (g/m1) 的强化中性(pH 7.0)溶液对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果基本相同。
将欧洲标准悬液定量杀菌试验中的有机物牛血清白蛋白由3% (g/m1)减为0.3%(g/m1), 模拟干净条件进行试验。结果,上述戊二醛溶液对枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率达100% 所需时间为3.0 h, 和载休法所测(3.5 h)差别不大。
2.3二氯异氰尿酸钠杀菌效果
欧洲标准悬液法规定杀灭率达99.999% 为合格, 载体法则以99.9% 为合格。结果, 在欧洲标准悬液法及改良欧洲悬液法中, 以含有效氯4 500 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液对枯草杆菌黑色变种芽孢分别作用30 min与20 min, 达消毒合格; 载休法则以含有效氯1 000 mg/L者作用l 0min 即日 。在以含有效氯4 500~ 5 500mg/L的该液作用时, 欧洲标准悬液法对枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭达合格的作用时间, 是改良欧洲悬液法者的1.5~ 3.0倍。
2.4欧洲标准悬液法与增含有机物载体法的比较
结果表明, 欧洲标准悬液法检测含有效氯5 000 mg//L的二氯异氰尿峻钠溶液对枯草杆菌黑色变种芽孢作用30 min, 杀灭率才达消毒合格(99,999%)标准: 而用增含有机物载休法检测, 仅需作用近20 min,杀灭率即达消毒合格(99.9% ) 标准。
3讨论
用欧洲标准悬液法和载体法检测戊二醛对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果基本相同;检测二氯异氰尿酸钠对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果差别较大。因有机物可使二氯异氰尿酸钠杀菌效果明显降低, 而只有有机物含量较高时才对低浓度戊二醛的杀菌作用有一定影响 , 故似乎对杀菌效果受有机物影响较小的消毒剂两法检测结果相近, 对杀菌效果受有机物影响较大的消毒剂两法所得结果差别较大, 这可能与欧洲标准悬液法使用较多的有机物有关。在本试验中, 当枯草杆菌黑色变种芽孢悬液中增含小牛血清50% (ml/m1)时,两法所测杀灭效果比较接近, 亦说明了这种可能。若如此, 则用欧洲标准悬液法评价消毒剂的消毒效果时可不再测定有机物对消毒效果的影响。对某些不适合用悬液定量杀菌试验评价消毒效果的消毒剂, 用载体法时虚测定有机物对消毒效果的影响, 以便提出正确的实用参考剂量。改良欧洲悬液法用含蛋白胨1% (ml/m1) 的PBS替代欧洲标准悬液法中含牛血清白蛋白3% (g/m1)的去离子水溶液, 在检测相同有效氯对枯草杆菌黑色变种芽孢达合格的杀灭效果时, 欧洲标准悬液法所需作用时间为改良欧洲悬液法时间的1.5~3.0倍。表明不同有机物及其含量对有效氯杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果的影响不一样, 试验选含牛血清白蛋白3% (g/m1)似较好。
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